穩(wěn)轉(zhuǎn)株篩選實驗

穩(wěn)轉(zhuǎn)株篩選實驗目的:

 穩(wěn)轉(zhuǎn)株長用于基因研究方向，便于長期觀察和檢驗基因?qū)τ诩毎δ芤约暗鞍椎南嗷プ饔谩?/span>

一般轉(zhuǎn)染實驗方法：

用轉(zhuǎn)染質(zhì)粒或病毒侵染的方法將構(gòu)建好的含靶基因的載體導入細胞，根據(jù)不同的基因載體中所含的抗性標志選用相應(yīng)的試劑進行篩選混合陽性克隆。在陽性混合克隆的基礎(chǔ)上，得到單細胞長出的陽性單克隆，繼而得到穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細胞株。

一般篩選方法：

1、轉(zhuǎn)染質(zhì)粒后，單克隆方法篩選穩(wěn)定細胞系

對大多數(shù)細胞轉(zhuǎn)染效率較低。對于基因過表達，如果轉(zhuǎn)染效率達到40%，基因過表達尚可。但是對于基因干擾實驗，對轉(zhuǎn)染效率要求遠遠高于基因過表達，通常質(zhì)粒轉(zhuǎn)染無法滿足。

另外，質(zhì)粒游離于細胞質(zhì)中，很快降解，無法滿足較長時間的檢測項目；質(zhì)粒轉(zhuǎn)染整合幾率極低，穩(wěn)定細胞株構(gòu)建耗時耗力，且得率很低，往往需要挑取單克隆株。

2、病毒感染篩選穩(wěn)定細胞株

病毒感染方法較質(zhì)粒轉(zhuǎn)染篩選單克隆方法更方便和高效，是目前主流的穩(wěn)定細胞系篩選方法。用慢病毒制備穩(wěn)轉(zhuǎn)細胞株，由于其高效整合、高效轉(zhuǎn)錄、高效表達、宿主范圍廣，感染效率高，且與細胞染色體整合而不發(fā)生基因重排，是制備穩(wěn)定細胞株的理想載體。

服務(wù)內(nèi)容：1、穩(wěn)定：15代以內(nèi)細胞穩(wěn)定表達。

      2、迅速：一般控制在1個月以內(nèi)完成構(gòu)建。

      3、經(jīng)濟：價格實惠。

      4、質(zhì)量：對外源基因進行嚴格鑒定。