細胞劃痕服務是項目組成之一,該項目實驗由經驗豐富的人員進行操作。
細胞劃痕服務本公司實驗過程所用試劑,全部為進口試劑,已實驗的準備性。
一、實驗前準備
試劑:完q培養基、PBS、無血清培養基(可選)
耗材:6/12/24 孔板、10 μL 槍頭、顯微鏡、相機
細胞:貼壁細胞,匯合度 70%~90%
二、實驗步驟
1. 細胞鋪板
將細胞接種到孔板中,培養至細胞鋪滿孔底 90%~100% 匯合(形成單層)。
2. 饑餓處理(可選,推薦)
吸去完q培養基,PBS 洗 1 次。
加入無血清 / 低血清培養基,饑餓 12–24 h,抑制增殖,只測遷移。
3. 劃痕
用無菌 10 μL 槍頭,在孔中y垂直、勻速、直線劃一道痕。
每孔盡量保持劃痕寬度、力度一致。
4. 洗去脫落細胞
吸掉舊培養基,PBS 洗 2–3 次,洗掉漂浮死細胞,只留下清晰劃痕。
5. 加入培養基培養
加入無血清 / 低血清培養基。
放入培養箱,分別在 0 h、6 h、12 h、24 h、48 h 拍照。
6. 拍照記錄
每孔固定相同位置、相同倍數拍照(一般 40×、100×)。
記錄劃痕寬度變化。
7. 數據分析
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