實驗操作流程:
1.轉染試劑的準備
a.將400u去核酸酶水加入管中,震蕩10秒鐘,溶解脂狀物。
b.震蕩后將試劑放在- 20攝氏度保存,使用前還需需蕩。
2。選擇合適的混合比例(1: 1-1: 2脂質體[1體積: DNA質量來轉染細胞。在一個轉染管中加入合適體積的無血清培養基。加入合適質量的MyoD或者EGFP的ONA,電蕩后在加入合適體積的轉染試劑,再次震蕩。
3、將混合液在室溫放置10-15分鐘。
4、吸去培養板中的培養基,用PBS或者無血清培養基清洗一次。
5、加入混合液,將細胞放回培養箱中培養-個小時。
6.到時后,根據細胞種類決定是否移除混合液,之后加入*培養基繼續培養24-48小時。
轉染 ,是將外源性基因導入細胞內的一種專門技術。隨著基因與蛋白功能研究的深入,轉染目前已成為實驗室工作中經常涉及的基本方法。轉染大致可分為物理介導、化學介導和生物介導三類途徑。電穿孔法、顯微注射和基因槍屬于通過物理方法將基因導入細胞的范例;化學介導方法很多,如經典的磷酸鈣共沉淀法、脂質體轉染方法、和多種陽離子物質介導的技術;生物介導方法,有較為原始的原生質體轉染,和現在比較多見的各種病毒介導的轉染技術。
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