尿路感染模型構建
更新時間：2025-06-23
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一、尿路感染模型構建流程（雌鼠膀胱感染模型）
1. 關鍵準備
特殊器材：24G靜脈留置針（剪去針頭保留軟管段）
菌株處理：UPEC菌株（如UTI89）在LB中培養(yǎng)至OD600=0.3（對數早期，粘附力更強）
小鼠預處理：
禁水4小時后腹腔注射速尿（10mg/kg）促進膀胱排空
麻醉后使用溫生理鹽水沖洗尿道口
2. 精準接種技術
將50μL菌懸液（含1%臺盼藍染色驗證）吸入PE-10導管
45度角插入尿道，遇到阻力后回抽0.5cm（確保進入膀胱）
緩慢推注后立即：
垂直提起小鼠尾部保持30秒
輕壓腹部3次促進細菌分布
3. 感染驗證時間點
早期定植：2h后處死檢測膀胱細菌量（應＞10^4 CFU）
炎癥峰值：24h尿液中白細胞數可達正常值20倍
慢性感染：72h后可見膀胱上皮內細菌群落（IBCs）
二、尿路感染模型構建創(chuàng)新改良方案
1. 原位生物發(fā)光成像模型
接種lux標記菌株（如UTI89-lux）
使用IVIS系統(tǒng)動態(tài)監(jiān)測感染進展（需提前脫毛）
2. 精確定量移植模型
術前24h膀胱內灌注0.1M鹽酸損傷黏膜
接種后2h膀胱灌注D-甘露糖（競爭性抑制細菌清除）
三、關鍵注意事項
導管選擇對比表：
| 導管類型 | 適用情況 | 穿孔風險 |
|---------|----------|----------|
| 24G留置針 | 常規(guī)模型 | 5-8% |
| PE-10管 | 慢性模型 | ＜3% |
| 34G微針 | 幼鼠實驗 | 近乎0 |菌液配制要點：
使用PBS+0.1%明膠作為懸浮劑
接種前37℃預熱避免膀胱痙攣
術后護理創(chuàng)新：
在飲水中添加5%葡萄糖（促進細菌增殖）
使用代謝籠分時段收集尿液
四、新型評估技術
超聲顯微成像：
使用Vevo 3100系統(tǒng)監(jiān)測膀胱壁增厚（分辨率達30μm）
微流控芯片檢測：
取10μL尿液直接檢測ATP含量（與細菌量正相關）
三維病理重建：
膀胱連續(xù)切片免疫熒光染色后數字化重構
五、常見問題解決方案
問題1：接種后尿液反流
方案：采用"三指壓迫法"（同時按壓恥骨聯(lián)合和雙側腹股溝）問題2：感染率不穩(wěn)定
方案：在菌液中添加0.01%粘液素（增強定植）問題3：繼發(fā)腎感染
方案：接種后立即膀胱灌注2%利多ka因（抑制輸尿管蠕動）
