一、實驗步驟
1. 制備單細胞懸液
消化貼壁細胞 / 處理組織，充分吹打成單細胞。
40~70 μm 濾網過濾，去除團塊（防止堵針）。
離心棄上清，用分選緩沖液重懸。
2. 細胞計數與濃度調整
濃度：1×10?~1×10? /mL
體積：根據分選量一般 100~500 μL / 管
3. 設對照管（必須?。?/h3>每組必須設：未染色細胞管（調電壓）
單陽性對照管（調節補償）
同型對照管（排除非特異性結合）
4. 抗體染色
細胞懸液中加入熒光抗體，避光孵育：
室溫：20~30 min
或 4℃：30 min
加分選緩沖液洗滌，離心去上清。
重懸，再次過篩，上機。
5. 活死染色（可選）
上機前加入 7-AAD 或 PI，排除死細胞。6. 上機分選
先跑未染色、單染管，調電壓、調補償。
圈選目的細胞群：
FSC/SSC 圈活細胞
去黏連、去碎片
根據熒光圈目標群
接收管預先加入完q培養基 / 血清（保護細胞）。
選擇分選模式：
純度優先（Purity）
富集模式（Enrich）
單細胞模式（Single cell）
7. 分選后處理
分選后離心，重懸培養 / 提取蛋白 / RNA。
可復檢流式，檢測分選純度
未染色細胞管（調電壓）
單陽性對照管（調節補償）
同型對照管（排除非特異性結合）
細胞懸液中加入熒光抗體，避光孵育：
室溫：20~30 min
或 4℃：30 min
加分選緩沖液洗滌，離心去上清。
重懸，再次過篩，上機。
先跑未染色、單染管，調電壓、調補償。
圈選目的細胞群：
FSC/SSC 圈活細胞
去黏連、去碎片
根據熒光圈目標群
接收管預先加入完q培養基 / 血清（保護細胞）。
選擇分選模式：
純度優先（Purity）
富集模式（Enrich）
單細胞模式（Single cell）
分選后離心，重懸培養 / 提取蛋白 / RNA。
可復檢流式，檢測分選純度
上一篇： 細胞周期實驗
下一篇：YLB978細胞共培養實驗
