細胞分離實驗(組織→單細胞懸液)
用途:從組織(血管、肝臟、腫瘤、動脈粥樣硬化斑塊、血液)中分離出活的單細胞,用于流式、培養、分選。
一、試劑耗材
PBS(預冷)
組z消化液:膠原酶 II / IV(常用 0.1%–0.2%)
或 膠原酶 + 胰m混合消化液
細胞篩網:70 μm 或 40 μm
離心管、培養皿、剪刀、鑷子
含血清培養基(終止消化)
二、標準實驗流程
1. 取材
無菌條件下取出組織。
用冷 PBS沖洗,洗掉血污、脂肪、結締組織。
剪成 1 mm3 左右小碎塊。
2. 消化(最關鍵)
把碎組織轉入離心管,加入預熱消化液,放入 37℃水浴 消化:
一般組織:30–60 min
疏松組織:20 min
致密組織(斑塊、動脈):1–2 h
期間每隔 5–10 分鐘 輕輕吹打 / 顛倒 一次。
3. 終止消化
加入2–3 倍體積 含 10% 血清的完q培養基,終止消化(血清抑制酶)。
4. 過濾去殘渣
用吸管輕輕吹打后,過 70 μm 細胞篩,去掉未消化的組織塊,只留單細胞懸液。
5. 離心
轉速:1000 rpm(≈6000 g)
時間:5–8 min
棄上清。
6. 重懸 & 計數
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